网络剧《兄弟，别闹！》的主要角色是五对兄弟，他们来自中国不同地区，年龄、身份各异。其中包括吉林农村的中学生、混迹香港的古惑仔、奔波劳碌的IT程序员、常常失败的小偷、理发店老板娘和大工。虽然这五对兄弟性格各异，但对彼此都充满忠诚，互相帮助。他们常常面临各种困境，但总是怀着美好的愿望想要一起解决问题。然而，受限于每个人的智商和情商，总会搞砸事情，从而演绎出爆笑的故事情节。